消毒灭菌对细胞株培养的重要性
细胞株严格的消毒灭菌对保证细胞培养的成功是极为重要的,其方法分为物理法和化学法两类。前者包括干热、湿热、滤过、紫外线及射线等,后者主要指使用化学消毒剂等。
①热灭菌:玻璃器皿,160~170℃,90~120min或180℃45~60min。
?、谡羝鹁河糜诓A髅蟆⒙似飨鸾喝?、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等,不同物品其有效灭菌压力和时间不同,如培养用液、橡胶制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高压灭菌10min;布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(121.3℃)高压灭菌15~20min。
?、勐斯菏视诤胁荒腿瘸煞值呐嘌褪约恋某?,用孔径为0.22μm微孔滤膜可除去细菌和霉菌等,用此滤膜过滤两次,细胞株可使支原体达到某种程度的去除,但不能除去病毒。
?、茏贤庀撸鹤贤庀叩牟ǔの?00~300nm,zui强是在254 nm,6~15平方米zui少一只紫外灯,高度要在2.5m以下,湿度45%~60%,杆菌效果好,球菌次之,霉菌、酵母菌zui差,实验前应不低于30分钟的照射时间。
?、菅粝荆旱庇鲇邢赴嘌鱿侄啻挝廴?,或实验室两个月一次的常规消毒,均可用高锰酸钾5~7.5g,加甲醛(40%)10~15ml,混合放入一开放容器内,立即可见白色甲醛烟雾,消毒房间需封闭24小时,致少4小时以上。
⑥煮沸消毒:紧密情况时使用,金属器械和胶蹇在水中煮20~30分钟,趁热倾去水分即可使用。
?、呋荆夯б┢废久鹁ㄊ怯τ媚苌彼牢⑸锏幕е平邢久鹁姆椒?。实验室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。细胞株常用的有:2%煤酚皂溶液(来苏尔)、0.25%新洁尔灭、3~5%甲醛溶液、75%酒精。